Характеристика возбудителя лептоспироза

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РФ

ФГОУ ВПО

ОРЛОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ

 

Кафедра микробиологии и вирусологии

 

 

 

 

К У Р С О В А Я   РАБОТА

по дисциплине «Микробиология»

 

специализация «Ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов»

 

на тему: «Характеристика возбудителя лептоспироза»

 

 

 

 

Выполнил: студент 2 года обучения

ф-та «Биотехнологии и веет. медицины»

Должикова О. А.

Руководитель: ст. преподаватель Михеева Е. А., к.б.н.

/>/>           «       »

Дата проверки работы

 

 

 

Орёл 2007

Содержание:

Оглавление

Введение. 3

1 Краткая характеристика болезни. 4

2 Характеристика возбудителя. 4

2. 1 Материал для исследования. 4

2. 2 Морфология. 4

2. 3 Культуральные свойства микроорганизма. 4

2. 4 Биохимические свойства. 4

2. 5 Антигенная структура. 4

2. 6 Токсинообразование. 4

2. 7 Устойчивость. 4

3 Биопрепараты и иммунитет. 4

Заключение. 4

Список литературы… 4

Приложение. 4

Введение

 

Лептоспироз — инфекционная природно-очаговая болезнь жи­вотных и человека, характеризующаяся кратковременной лихо­радкой, анемией, желтухой, гемоглобинурией, геморрагическим диатезом, некрозом слизистых оболочек и кожи, атонией органов пищеварения, абортами. Болезнь может протекать бессимптомно.

Впервые болезнь описали в Германии Weil (1886) и в России Н. П. Васильев (1888). Возбудителя болезни открыли в Японии Inodo и со-авт. в 1914 г. Им удалось изолировать спирохет из печени морских свинок, заражен­ных кровью больных «инфекционной желтухой» людей. В 1935 г. С. Н. Никольский и сотр. описали на Северном Кавказе остропротекающую болезнь крупного рогатого скота, названную иктерогемоглобинурйей. Роль лептоспир в этиологии иктерогемог-лобинурии доказали В. И. Терских (1939) и М. В. Земсков (1940).

По актуальности,эпидемиологической значимости и экономическому ущербу лептоспироз стоит в одном ряду с туберкулезом и бруцеллезом впереди пастереллеза, сибирской язвы, листериоза, эмкара и др

Именно поэтому проблема, рассмотренная в данной работе, является актуальной.

Объектом данной работы является возбудитель лептоспироза, предметом – характеристика болезни; характеристика возбудителя; биопрепараты и иммунитет.

Целью данной работы является изучение болезни, которую вызывает возбудитель, рассмотрение его свойств и изучение средств специфической профилактики.

Для достижения цели мы изучили механизм развития и клинические признаки болезни. Подробно рассмотрели морфологию, культуральные свойства, биохимические свойства, антигенную структуру, токсинообразование и устойчивость возбудителя. Проанализировали целесообразность применения биопрепаратов и формирование иммунитета.

Данная работа написана на основе теоретических, методических и публицестических материалов.

 

 

 

 

 

 

 

1 Краткая характеристика болезни

 

Патогенность.К лептоспирозу наиболее восприимчивы круп­ный рогатый скот (серогруппы L. Pomona и L. Hebdomadis), свиньи (серогруппы L.Pomona и L. Tarassovi), овцы, лисицы, песцы, ме­нее—лошади, козы, буйволы, верблюды, олени, ослы, собаки, кошки, куры. Болеет и человек. Основные носители лептоспир в природных очагах: серые и водяные полевки, ондатры, серые кры­сы, домовые мыши, землеройки.[приложение 1]

К экспериментальному заражению наиболее чувствительны зо­лотистые хомяки, крольчата-сосуны и молодые морские свинки.

Эпидемиология. Лептоспироз — широко распространенный зооноз, встречается во всех частях света. Существуют природные очаги лептоспироза — преимущественно в лесах, заболоченных местностях, реках. Источником инфекции в них являются дикие животные — грызуны, лисы, песцы и др. Моча животных попа­дает в воду, загрязняет почву, растительность. Заболеваемость ха­рактеризуется строгой сезонностью (июнь — сентябрь) и связа­на с сельскохозяйственными работами (покос лугов, уборка сена), а также сбором грибов, ягод, охотой, рыбалкой. В сельс­кой местности источником инфекции могут быть домашние животные: свиньи, крупный рогатый скот, собаки. Заражение может происходить пищевым путем, например при употребле­нии молока. Возможен также контактно-бытовой путь передачи — при уходе за больными животными. Однако основной путь пе­редачи инфекции — водный. Нередко в сельской местности при купании людей в загрязненных мочой больных животных водо­емах возникают «купальные» вспышки. Возможны случаи лептос­пироза также в портовых городах, где много крыс.[3]

Патогенез.Входными воротами возбудителя являются повреж­денные кожа и слизистые оболочки. Патогенные лептоспиры бла­годаря активной подвижности преодолевают защитные барьеры организма и быстро проникают в кровь. Через 12 ч после зараже­ния их обнаруживают в печени. Затем наступает генерализация инфекции (бактеремия), размножение и накопление лептоспир в печени, почках, надпочечниках, селезенке, легких, появляется ли­хорадка. К этому времени образуются антитела. Они инактивиру­ют лептоспиры, и происходит их элиминация из крови и паренхи­матозных органов. В почечных же клубочках и канальцах лептос­пиры недоступны воздействию антител, где они активно размно­жаются и выделяются с мочой.[8]

Лизис лептоспир сопровождается накоплением токсических веществ, под действием которых повышается проницаемость со­судов, лизируются эритроциты, происходят кровоизлияния, раз­виваются гематурия и желтуха, поражается нервная система. Ток­сикоз может привести к гибели животного.[приложение 2]

Клиническая картина. Инкубационный период обычно продол­жается 7—10 дней, заболевание — 5—6 нед. Болезнь, как пра­вило, начинается остро, температура тела повышается до 39— 40 «С, появляются головная боль, резкие боли в мышцах, осо­бенно в икроножных. В зависимости от поражения тех или иных органов появляются симптомы их повреждения: почечная недо­статочность, желтуха и др. Характерна волнообразная лихорадка. Клинические формы лептоспироза различны — от легких до тяжелейших, приводящих к смерти.2 Характеристика возбудителя2. 1 Материал для исследования

 

Материалом для исследования слу­жат: кровь (лучше брать на 3…5 сутки болезни при повышенной температуре тела), моча, кусочки паренхиматозных органов, поч­ка, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочевой пузырь с содержимым, абортированный плод. Патологический материал отбирают не позже 2 ч после гибели животного. Мочу собирают при естественном мочеиспускании; в летнее время исследуется не позднее 3 ч после взятия.

Микроскопия. Исследуют мочу, цитратную кровъ, тка­невую суспензию из коркового слоя почки, печени, у плода —из всех органов. Микроскопию проводят в раздавленной капле с конденсором «темного поля». Типичные лептоспиры активно подвижны и имеют форму прямой или S-образной с загнутыми в виде крючков концами серебристо-белой нити. Лептоспир также можно обнаружить в срезах из органов после импрегнации сереб­ром по методу Левадити.[5]

Выделение культур. Материал засевают по 1…3 кап­ли в 3…5 пробирок со специальной питательной средой и инкуби­руют при 28…30°С в течение З мес. Лептоспиры начинают раз­множаться через 7…20 сут, иногда через 1…2 и очень редко — 3 мес. Наличие роста определяют темнопольной микроскопией раздавленных капель на 3, 5, 7, 10-е сутки и далее через каждые 5 сут. При обнаружении размножения лептоспир делают пересев в 3…5 пробирок со свежей средой. Выделить культуры лептоспир удается не всегда.[4]

Биологическая проба. Метод более чувствительный, чем культуральный; проводится с целью выделения и очистки культур лептоспир, определения их вирулентности и дифферен­циации от сапрофитов.

Заражают 20…30-суточных золотистых хомяков и крольчат-со­сунов в возрасте 10…20 сут. Каждую пробу испытывают на двух животных; на 4…5-е сутки убивают первого, на 14… 16-е сутки — второго, если оно не погибло раньше. Из сердца, печени и почек убитых или павших животных проводят посевы. Сыворотку крови убитого через 14… 16 сут животного исследуют в реакции микроаг­глютинации (РМА) с лептоспирами 13 серогрупп. Положительная РМА в разведении 1:10 и выше указывает на наличие лептоспир в исследуемом материале.

Серологическое исследование. Для серологи­ческой диагностики лептоспироза используют РМА и реакцию аг­глютинации (РА). Пробы крови берут на 5…7-е сутки болезни и при необходимости повторно через 7… 10 сут. Следует учитывать, что антитела в крови у выздоровевших животных могут сохранять­ся до двух лет и более.

РМА ставят в лунках полистироловых пластин. В качестве ан­тигенов используют живые 5,..15-суточные культуры лептоспир 13… 16-й серогрупп. Сыворотку исследуют с антигенами каждой серогруппы в разведениях 1:5, 1: 10 и т.д. до титра. В лунки вно­сят по 0,1 мл разведенной сыворотки и 0,1 мл антигена. Контро­лем служит антиген с физиологическим раствором (по 0,1мл). Пластины выдерживают при 30 °С в течение 1 ч; результаты учи­тывают в препаратах раздавленной капли в микроскопе с конден­сором темного поля. Агглютинация проявляется в склеивании лептоспир и образовании «паучков», состоящих из нескольких де­сятков или сотен бактерий. Свободные концы лептоспир сохраня­ют подвижность. Оценивают реакции в крестах по 4-балльной си­стеме: положительная — не менее чем два креста в разведении сы­воротки 1: 50 и выше, при отсутствии агглютинации в контроле.

РА ставят на стеклянной пластинке, на которую наносят каплю разведенной 1:100 исследуемой сыворотки и добавляют равное ко­личество антигена. Лептоспирозные антигены для РА выпускают шести серогрупп (для каждой отдельно), представляющие собой концентрированную взвесь лептоспир в альбуминовой питатель­ной среде. При наличии в сыворотке специфических антител на­ступает агглютинация. Оценка результатов производится в крестах по 4-балльной системе. Положительной считают реакцию два кре­ста и выше, сомнительной — один крест. Для выявления лепто­спир в крови, моче, паренхиматозных органах, в тканях абортированного плода, в воде и почве предложен иммунофлюоресцент-ный метод.[9]

 

2. 2 Морфология

 

Лептоспиры — спиралевидные бактерии диамет­ром 0,1…0,25 мкм и длиной от 6…15 до З0 мкм, образующие около 20 мелких, тесно расположенных первичных завитков и 1…2 вто­ричных, придающих клетке форму букв Г, S, С. Осевая нить со­стоит из двух фибрилл. В темном поле они имеют вид тонких се­ребристых нитей с утолщенными и загнутыми в виде крючков концами [приложение 3]. У клеток некоторых штаммов концы прямые (бескрючковые лептоспиры).

Для лептоспир характерна активная подвижность, наиболее ча­стый тип движения — вращательно-поступательный. Спор не об­разуют. Грамотрицательные, плохо окрашиваются анилиновыми красителями, по Романовскому—Гимзе — в красный цвет, фиксация мазка существенно изменяет их мор­фологию; используют также метод имп­регнации серебром по Левадити.[1]

2. 3 Культуральные свойства микроорганизма

 

Лептоспиры — хемоорганотрофные факультативно-анаэроб­ные бактерии. Культивируют их в аэроб­ных условиях при 28…30°С на специаль­ных средах, содержащих 5…10 % сыворот­ки крови кролика или овцы, дистиллиро­ванную, водопроводную, колодезную во­ду или фосфатный буфер (рН 7,2…7,6): среды Уленгута, Терских, Ферворта—Воль­фа, Любашенко и др. Рост лептоспир обыч­но проявляется через 7…20сут, иногда 1…2 мес. Среда при этом не изменяется.

Среда Уленгута. Готовят ее из водопроводной воды (рН 7,2— 7,3), стерилизуют дробно текучим паром. К 10 объемным частям во­ды добавляют 1 часть стерильной сыворотки крови лошади или кро­лика, смешивают, разливают асептически в пробирки по 3 мл и за­ливают 1 мл стерильного жидкого парафина.[6]

Среда Ферворта — Вольфа (модификация С. И. Тарасова)

900 см3 дистиллированной воды смешивают с 0,5 г натрия хло­рида, 1 г пептона Дифко или Витте, 100 см3 концентрированного раствора фосфатного буфера (рН 7,2). Смесь в колбе автоклавиру-ют при 105 ± 1 0С в течение 30 мин. На следующий день ее дважды фильтруют через бумажный фильтр, разливают в пробирки по 5 см3 и снова автоклавируют 30 мин при 120 ± 1 0С. В пробирки с прозрачной средой добавляют по 0,5 см3 кроличьей сыворотки и прогревают на водянойбане при 56—58 °С в течение 30 мин.

Для проверки на стерильность пробирки со средой выдержива­ют в термостате 3—5 сут при 37 °С.[3]

Среда Любашенко. Фильтрованную через бумажный фильтр нехлорированную водопроводную воду (или колодезную, речную) стерилизуют в автоклаве при 1 атм 30 мин, охлаждают, устанавли­вают рН 7,3—7,4, добавляют 5 % сыворотки крови кролика или барана, прогретой при 56 °С в течение Iч. Затем среду пропускают через фильтрующие пластины СФ в фильтре Зейтца и асептически (в боксе) разливают в пробирки. Для контроля стерильности среды пробирки помещают в термостат при 370 С на 48 ч.

На плотных средах (Кокса, ВГНКИ) образуют колонии S-, О- и R-форм. S-форма — типичная для патогенных штаммов, ее коло­нии прозрачные, в виде диска с ровным краем.

 

 

2. 4 Биохимические свойства

 

Изучены недостаточно. Способность ферментировать углеводы отсутствует; образуют каталазу, оксидазу, липазу и другие ферменты.[2]

 

2. 5 Антигенная структура

 

Лептоспиры обладают белковым сомати­ческим антигеном, определяющим их видовую специфичность. Поверхностные полисахаридные антигены служат критериями групповой и серовариантной дифференциации. Антигенные свой­ства лептоспир изучают в реакции микроагглютинации и методом иммуноадсорбционного анализа.

 

2. 6 Токсинообразование

 

Истинный экзотоксин лептоспиры не синтезируют. Они образуют эндотоксин и патогенные ферменты: гемолизин, фибринолизин, плазмокоагулазы, гиалуронидазы, ли­пазы, лецитиназу, которые выделяются в результате лизиса леп­тоспир. Патогенностью обладают свежевыделенные штаммы леп­тоспир; при культивировании на питательных средах это свойство относительно быстро теряется.

2. 7 Устойчивость

 

Резистентность лептоспир к физическим и химическим средствам соответствует устойчивости вегетативных форм бактерий.Лептоспиры — типичные гидробионты. В воде рек и озер сохраняются до 200 дней, в сточных водах — до 10 дней, в навозной жиже — 24 ч, во влажной почве с нейтральной или слабощелочной реакцией — до 279 дней, но быстро (0,5-2,5 ч) погибают в сухой почве.

В моче крупного рогатого скота, свиней и грызунов они сохраняются от 4 ч до 6-7 дней в мышечной ткани – 48 ч; в свежем молоке — 8…24 ч; в почках убойных животных при 0…4 °С — до 28 сут; в замороженном мясе погибают через 10 сут. Чувствительны к действию поваренной соли: в засоленном (4,8 % NaCl) мясе крупного рогатого скота погибают через 10 сут; в гипертоническом растворе поваренной соли (2,8 %) — через 15 мин.[7]

При кипячении погибают моментально, при 56…580С — в те­чение 25…30 мин. Быстро гибнут при высушивании и под воздей­ствием прямого солнечного света. Низкие температуры консервируют лептоспир. Растворы (0,1%-й соляной кис­лоты, 0,5%-й фенола) инактивируют лептоспиры за 20 мин. Лептоспиры чувствительны также к некоторым антибиотикам и химиотерапевтическим препаратам.

 

3 Биопрепараты и иммунитет

 

После переболевания у животных формируется длительный и напряженны

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.