Трансплантация эмбрионов крупного рогатого скота

1.  Введение.

Биотехнологияв воспроизводстве и селекции крупного рогатого скота имеет особое значение.Крупный рогатый скот относится к одноплодным видам млекопитающих. Поэтому отодной коровы можно получить в лучшем случае одного теленка в год, в то время,как в её яичнике содержатся сотни тысяч незрелых половых клеток (ооцитов),представляющих огромный генетический резерв. Кардинальное решение проблемыускоренного воспроизводства скота состоит в том, чтобы перейти к нетрадиционнымспособам увеличения плодовитости. Для этого применяется целый рядбиотехнических методов, разработанных на основе углубленных исследованийрепродуктивной функции, её регуляции, а также на совершенствование приемовманипуляции с эмбрионами, половыми и соматическими клетками. В перспективебиотехнология рассматривается как основа ускоренного воспроизводствавысокопродуктивных животных и целых популяций.

Впоследнее время приобрела практическое значение трансплантация эмбрионов,которая рассматривается как эффективный метод биотехнологии ускоренного размножения высокоценных племенных животных.Некоторые вопросы трансплантации эмбрионов крупного рогатого скота рассмотреныв данной курсовой работе.

2.   Отбор доноров.

Вбольшинстве случаев в качестве коров-доноров отбирают матерей потенциальныхплеменных быков. Благодаря этому обеспечивается высокий селекционныйдифференциал. Оценка и отбор коров-доноров, выделенных в группу матерей быков,проводят в два этапа. На первом этапе племенная ценность донора оценивается поглавным признакам молочного скота — по уровню молочной продукции ижирномолочности. На втором этапе, когда отобраны доноры с высокой племеннойценностью по главным признакам, число признаков в зависимости от цели селекциирасширяется. К ним относят форму вымени и сосков, свойства молокоотдачи,резистентность, крепость костяка и копыт, тип и воспроизводительные качества.

Нужноиметь в виду, что  оценка коровы-донорапо родословной и собственной продуктивности является не окончательной, так какв этом случае не учитывается эффект расщепления и рекомбинации генов. Поэтомуокончательно оценивать корову-донора можно только при получении и оценке еепотомства.

Высокиезатраты на получение телят путем трансплантации эмбрионов обусловливаютнеобходимость отбирать таких доноров, от которых регулярно можно получатьбольшое количество эмбрионов. Предпочтение следует отдавать коровам, сохранившимв течение трех отелов стабильную воспроизводительную способность.Исследованиями установлено, что потенциальные коровы-доноры с хорошими иустойчивыми воспроизводительными способностями отличаются предрасположенностьюк воспроизводству эмбрионов, которые можно регулярно получать через каждые двамесяца.

Межотельныйпериод является интегральным показателем воспроизводительной способности коров.Его составные части: сервис-период и период стельности.

Сервис-периодболее точно и намного раньше, чем интервал между отелами, выявляет потенциальные возможности воспроизводительнойфункции у коров. Он тесно связан с межотельным периодом (коэффициент корреляциисоставляет 0.9). Оптимальный сервис-период не должен превышать 80 дней. Однакоанализ сервис-периода, проведенный в ведущих племенных стадах черно-пестройпороды, показал, что данный показатель воспроизводительной функции коров имеетвысокий коэффициент изменчивости, который составил 61%.

Сервис-периодв основном зависит от интервала между отелом и первым осеменением, и интерваламежду первым и последним, т.е. эффективным осеменением. Высокопродуктивныхкоров следует осеменять на втором месяце после нормального отела. Этообусловлено тем, что первый половой цикл проявляется слабо, половая охотаклинически плохо определяется или вовсе не обнаруживается.

Первоеосеменение коров на втором месяце после отела не удлиняет сервис- и межотельныйпериод. При оптимальном сервис-периоде до 80 дней после первого и второгоосеменений средняя оплодотворяемость коров составляет 95-98%, апродолжительность межотельного периода не превышает одного года.

Дляоценки воспроизводительных способностей коров, отобранных в качествепотенциальных доноров, необходимо анализировать такие параметры какоплодотворяемость от первого осеменения и индекс осеменения. При правильнойтехнике осеменения и своевременном определении половой охоты оплодотворяемостькоров от первого осеменения должна составлять в среднем 60%.

Важнымпоказателем воспроизводительной способности коров является индекс осеменения,т.е. количество осеменений на одно оплодотворение. Индекс осемененияхарактеризуется высокой степенью изменчивости — коэффициент вариабельностиможет достигать 70%. Существенное влияние на изменчивость индекса осемененияоказывают такие факторы, как продолжительность периода от отела до первогоосеменения, своевременное выявление коров в половой охоте, оплодотворяющаяспособность спермы быка и др. Индекс осеменения коров, выделенных в группупотенциальных доноров, не должен превышать 1.5. В идеальном случаепотенциальная корова-донор должна иметь индекс осеменения равный 1. Укоров-доноров при всех отелах должны отсутствовать осложнения(мертворождаемость, задержание последа, послеродовые заболевания половыхорганов).

Через15-20 суток после отела ветеринарный специалист методом ректальной пальпацииконтролирует у потенциальной коровы-донора состояние половых органов, чтобыисключить такие нарушения воспроизводительной функции как киста яичника,гипофункция, воспаление яичниковой связки, эндометриты.

3.   Суперовуляция.

Важнымзвеном в современной биотехнологии трансплантации эмбрионов крупного рогатогоскота является гормональноевызывание суперовуляции у коров-доноров. В группудоноров переводят только тех коров, которые положительно реагируют на введениегормонов. Для стимуляции множественной овуляции используют гонадотропин СЖК всочетании с простагландинами и другими биологически активными веществами[3].Этот способ, как показывает практика, позволяет вызвать суперовуляцию примерноу 70% коров.

Однимиз существенных недостатков этого способа суперовуляции является крайне высокаястепень вариабельности числа овуляций, даже при использовании одной и той жеконцентрации гонадотропина СЖК. Она составляет от 0 до 50 овуляций на однукорову-донора. Оптимальным результатом суперовуляции является выход из яичникав воронку яйцепровода 10-20 яйцеклеток.

Shelton,J.N. [7], подытоживая результаты исследований, пришел к выводу,  что на инъекции гонадотропинов 25-35%коров-доноров не реагируют, а у положительно реагирующих коров (3 и болееовуляций) вариабельность реакции яичника настолько велика, что становитсяневозможным надежное планирование программы пересадки эмбрионов. Kenneth, L.W. [4]считает, что с учетом имеющейся изменчивости лишь половина коров,реагирующих на введение гонадотропинов, может дать 4-5 эмбрионов, пригодных длятрансплантации. Следовательно, в основном эмбрионы можно получить менее чем отполовины первоначально тщательно отобранных потенциальных коров-доноров.

Посовременному представлению реакция коров на суперовуляцию в значительнойстепени определяется количеством и качеством фолликулов яичников во время ихстимуляции гонадотропинами. Экспериментально было доказано, что во времясуперовуляции для получения хорошей реакции необходимо наличие определенногоколичества малых антральных фолликулов, чувствительных к гонадотропной стимуляции.Недостаток таких фолликулов, или напротив, наличие больших по размеруфолликулов снижают уровень реакции или она вообще отсутствует. Это можетсвидетельствовать об интраовариальном регулировании процесса суперовуляции.Поскольку фолликулы растут асинхронно, то в каждый период инъекциягонадотропинов будет оптимальной лишь для ограниченного числа фолликулов.

Кромеразмера фолликула, на реакцию введения гонадотропинов существенное влияниеоказывает интенсивность митотического индекса, которая у нормального фолликулаповышается при формировании полости. Установлено что высокий митотическийиндекс неатретических фолликулов положительно коррелирует с интенсивностьюсуперовуляции.

Имеютсяданные, свидетельствующие о том, что на реакцию гонадотропинов отвечают толькоте малые антральные фолликулы, размеры которых не превышают 2 мм. Установленочто такие фолликулы гормонально активны и быстро овулируют.

Атретическиефолликулы с высоким митотическим индексом, напротив, не овулируют, а послепрохождения фазы лютеинизации подвергаются её воздействию и имитируют наличиежёлтого тела.

Следовательно,для эффективной суперовуляции решающим является физиологическое состояние фолликулов в лютеиальной фазе яичника.

Анализработы станций по пересадке эмбрионов показал, что хорошими донорами можносчитать коров, которые после многократных суперовуляций имеют хорошую реакциюяичника и производят большое число пригодных для пересадки эмбрионов за одновымывание. Однако лишь небольшая часть доноров обнаруживает повторную реакциюяичников после вызывания суперовуляции. В основном же коровы-доноры нерегулярноотвечают на повторную гормональную обработку, поэтому количество овуляций ивыход эмбрионов не являются стабильными.

Дляоценки предрасположенности, или потенциальной изменчивости коров на пригодностьв качестве доноров, были рассчитаны вариансы признаков, на основе которых былопределен коэффициент повторяемости. Рассчитанные коэффициенты повторяемостипризнаков предрасположенности коров в качестве доноров колебались в пределах17.3-23.3%. Это свидетельствует о том, что по итогам оценки за первое вымываниеэмбрионов надежность повторного результата составит лишь 20%. Следовательно, пооценке признака пригодности за первое вымывание эмбриона невозможно достоверносудить о пригодности коровы в качестве донора.

Изменчивостьпригодности коров в качестве доноров включает наследственные и ненаследственныефакторы. Причем вклад ненаследственных факторов значительно выше вкладафакторов генетических.

Отмечено,что прекращение кормления донора после обработки гонадотропинами достоверноуменьшает реакцию яичника на введение гормонов. Для суперовуляции и получениябиологически полноценных эмбрионов необходимо обеспечить полноценное кормлениедонора, сбалансированное не только по основным питательным веществам, ноособенно по аминокислотам и микроэлементам. Кормление доноров должно бытьтаким, чтобы они находились в хорошем физиологическом состоянии.

Дляполучения суперовуляции наиболее широкое распространение во многих странах мираполучил ГСЖК с простагландинами.

Хорошихрезультатов суперовуляции можно ожидать, когда к моменту инъекчии гонадотропинав яичниках коровы функционирует желтое тело диаметорм 1.5 см. При наличии водном из яичников  развитого фолликуладиаметром 10 мм полиовуляция снижается. Интенсивность множественной овуляциитакже снижается когда кроме хорошо развитого желтого тела в яичнике находитсяразвитый фолликул, фолликулярная или лютеиновая киста. Следовательно,эффективность суперовуляции в большой степени определяется физиологическимсостоянием яичников.

Начисло овуляций существенное влияние оказывает интервал между временем введенияГСЖК и началом половой охоты. Определен оптимальный интервал, во время которогоможно получить наибольшее количество овуляций, он составляет 4-7 суток. Приуменьшении этого срока до 1-3 суток число овуляций существенно снижается, а приувеличении свыше 7 суток, хотя число овуляций возрастает, но формируютсябиологически неполноценные яйцеклетки.

Наивысшийэффект суперовуляции достигается при введении ГСЖК между 10-12 сут эстральногоцикла (середина лютеальной фазы) и через 48 часов простагландина F2a(или его аналога),вызывающего регрессию желтого тела, половую охоту и овуляцию. В течение 48часов после инъекции простагландина у 95% коров-доноров происходит полиовуляциясо всеми признаками эструса. При этом доноры могут быть осеменены только всжатые сроки. Установлено, что после такой технологии гормональной обработкикоров происходит в среднем 10 овуляций, а оплодотворяемость яйцеклетокдостигает 80%.

Другимгормональным препаратом с суперовуляционным действием являетсяфолликулостимулирующий гормон ФСГ. Суперовуляцию можно вызвать введениемочищенного ФСГ или его комбинации с лютеинизирующим гормоном ЛГ в соотношении5:1. В отличие от гонадотропина СЖК ФСГ вводят не однократно, а многократно.

Обобщениемногочисленных работ по использованию гонадотропина СЖК и ФСГ показало, чтонаблюдается либо одинаковая реакция яичников коров на оба гонадотропина, либоотмечается лучшая реакция при введении гонадотропина ФСГ.

Какотмечалось, следует иметь в виду, что многократная суперовуляция подверженабольшей вариабельности. Поэтому не все коровы-доноры имеют одинаковуюпредрасположенность к многократной суперовуляции. Для эффективной многократнойсуперовуляции необходим тщательный отбор доноров по ряду показателей этогопризнака.

Взаключение следует отметить, что гормональная стимуляция яичников коров,вызывающая полиовуляцию, связана с активизацией метаболических процессов удоноров. Поэтому для протекания нормальных процессов оогенеза, оплодотворения ибиологически полноценного формирования и развития зиготы коров-доноровнеобходимо обеспечить биологически активными веществами (витамины, незаменимыеаминокислоты). Кроме того, для этой цели используют препарат селевит.

4.   Осеменение коров-доноров.

Результатысуперовуляции определяются эффективным осеменением коров-доноров. Проблемаоплодотворения яйцеклеток и получения биологически полноценных эмбрионов все ещёостается открытой. Как показывают результаты исследований, только 60-65%эмбрионов пригодны для трансплантации, остальные яйцеклетки, образовавшиеся врезультате гормональной обработки гонадотропинами, оказываются либонеоплодотворенными, либо после оплодотворения отстают в развитии илидегенерируют. Причина этих нарушений остается неизвестной.

Дляискусственного осеменения коров-доноров необходимо использовать сперму тольковыдающихся быков-производителей, достоверно оцененных по качеству потомства. Какотмечалось, надежным критерием наследственных качеств быка служит коэффициентповторяемости, т.е. коэффициент регрессии будущих дочерей быка на числофактически имеющихся дочерей. Если генетическое превосходство дочерей быка,выраженное величиной отклонения от сверстниц, умножить на коэффициентповторяемости, то полученная величина будет характеризовать генетическоепревосходство будущих дочерей быка, или предсказанную разность. Предсказаннаяразность является одним из наиболее объективных качеств быка, разработанных всовременной селекции молочного скота.

Дляискусственного осеменения коров-доноров следует использовать, как правило,сперму производителей 1-й племенной категории, т.е. таких, племенная ценностькоторых превышает среднюю популяционную величину на два стандартных отклонения.В этом случае существенно повышаются темпы селекции и улучшается племеннаяценность новой генерации.

Племеннойподбор быков-производителей и коров-доноров осуществляется по заказному илицелевому спариванию родителей. В его основе должен лежать принципиндивидуального подбора в соответствии с селекционной программойсовершенствования существующих или создания новых пород, типов и линий.

Требованияк оценке оплодотворяющей способности спермы быков, предназначенной дляосеменения коров-доноров, должна быть значительно выше, чем при оплодотворенииостальных коров. Для повышения оплодотворяемости доноров  и выхода эмбрионов, наряду с использованиемвысококачественной спермы, необходимо определить сроки половой охоты для своевременногопроведения искусственного осеменения. Как правило, коров с гормональновызванной половой охотой осеменяют дважды: первый раз при начале появленияполовой охоты и второй — через 12-24 часа.

Внашей стране коров-доноров искусственно осеменяют дважды в день с интервалом10-12 часов каждый раз двумя-тремя дозами замороженной спермы. Так как присуперовуляции повышается число овулировавших яйцеклеток, в каждой дозе спермыдолжно быть не менее 50 млн подвижных спермиев.

День,в который проводится искусственное осеменение коровы-донора, считается датойоплодотворения. С этого дня начинается отсчет развития эмбрионов in vivoдо их извлечения.

5.   Извлечение и оценка эмбрионов.

Эффективностьметода трансплантации во многом определяется способом извлечения эмбрионов.Оплодотворенные яйцеклетки от суперовулированных коров-доноров могут бытьизвлечены тремя способами: после убоя коровы-донора; хирургическим;нехирургическим.

Извлечение эмбриона после убоя коровы-донора.Самым простым и надежным способом извлечения эмбрионов является убойкоровы-донора. Этот способ практиковался только на первых этапах освоенияметода трансплантации. В настоящее время из-за потери генетически ценнойкоровы-донора он не используется.

Извлечение эмбриона хирургическим способом.Важным моментом, обеспечивающим эффективность извлечения эмбрионов, являетсяопределение стадии их развития и места положения в поовых путях коровы-донора.Для трансплантации рекомендуется использовать бластоцисты, поэтому эмбрионыизвлекают между 7-8-ми сутками после первого искусственного осеменения (До). Имеется несколькоспособов хирургического извлечения эмбрионов: разрез верхнего свода влагалища,лапаротомия по белой линии живота и лапаротомия в области голодной ямки.

Хирургическийспособ извлечения эмбрионов является трудоемким, дорогостоящим и, что особенноважно, им нельзя пользоваться многократно. В настоящее время хирургическийспособ извлечения применяется в редких случаях, главным образом в научныхцелях.

Извлечение эмбрионов нехирургическим способом.Основное преимущество нехирургического способа извлечения эмбрионов заключаетсяв простоте манипуляций. Для этого не требуется специального операционногопомещения. Эмбрионы можно извлекать непосредственно в производственныхусловиях. С селекционной точки зрения, при правильном применениинехирургического способа воспроизводительная способность доноров не нарушается,что позволяет многократно использовать генетически ценных коров-доноров дляполучения от них большого числа потомков.

Вобщем виде извлечение эмбрионов нехирургическим методом происходит по следующейсхеме. Коров-доноров обследуют на наличие желтых тел, чистят и моют,ограничивают рацион и кратность кормления, а за сутки прекращают кормление ипоение. Перед самым извлечением эмбрионов дезинфицируют наружные половые органыкоров-доноров. Извлекают эмбрионы под местной анестезией. В рог матки вводятпродезинфицированный двухканальный резиновый или пластмассовый катетер снадувным баллончиком, в который нагнетают 10-155 куб см воздуха. Выход из рогаматки закрывают, надувая воздухом тонкостенный резиновый баллончик. Затем в рогвводят промывную жидкость и осторожно массируют, чтобы отделить эмбрионы отстенок матки. В качестве промывной среды применяют PBSдо 500 мл. Этот состависпользуется и для кратковременного культивирования эмбрионов.

Вымываниеповторяют 5-8 раз. Основную часть эмбрионов извлекают в первых трех-четырехсмывах. Промывание в обоих рогах матки, включая введение катетеров,продолжается 20-50 минут. За это время можно извлечь более 50% эмбрионов,находящихся на стадии морулы или бластоцисты.

Послевымывания эмбрионов в матку вводят раствор антибиотика с целью антисептики.

Вомногих странах разработаны различные устройства для нехирургического извлеченияэмбрионов. В нашей стране в ряде институтов ВАСХНИЛ успешно освоенынехирургические методы извлечения, позволяющие получать 60% от числаовулировавших яйцеклеток. Нужно иметь в виду, что в среднем из вымытыхяйцеклеток до 25% оказываются неоплодотворенными или дезинтегрированными.Причины выхода биологически неполноценных зигот до сих пор окончательно невыяснены.

Кратковременное культивирование и хранениеэмбрионов. Манипуляции с ранними эмбрионами, находящимися напредимплантационных стадиях развития, т.е. от момента их получения до введенияв рога матки реципиента, занимают от 1 до 5 часов. В этот период нужно создатьоптимальные условия, обеспечивающие сохранение их биологических качеств.Кратковременное хранение эмбрионов дает также возможность транспортировать их вдругие хозяйства.

Эмбрионыкрупного рогатого скота можно сохранить путем пересадки их в яйцепровод самокдругих видов млекопитающих. Лучше всего обеспечивается нормальноепредимплантационное развитие эмбрионов коров в яйцепроводе крольчих.Установлено, что эмбрионы коровы в яйцепроводе крольчихи могут успешноразвиваться до стадий, пригодных для трансплантации реципиентам, т.е. до морулыи бластоцисты. Недостатком этого метода является его трудоемкость и возможныепотери зигот при их переносе. В настоящее время широкое распространение получилметод краткосрочного хранения эмбрионов invitro.

Послеизвлечения и оценки на жизнеспособность эмбрионы переносят в питательные средыс температурой 37 градусов. Большинство сред, в которых культивируют и хранятэмбрионы, включают растворы солей, аминокислоты с бикарбонатным ионом какбуферным агентом, обеспечивающим pHв пределах 7.2-7.6.Проведенные исследования показали, что продолжительность культивирования безпотери биологических качеств эмбрионов возможна до 95 часов.

Впоследние годы проводятся исследования по краткосрочному хранению эмбрионов in vitroпри их охлаждении ниже 37 градусов. Разработка этого метода имеет большоепрактическое значение, т.к. позволяет существенно упростить манипуляции сэмбрионами и надежнее обеспечивает их транспортировку.

Оценка эмбрионов. Оценка эмбрионовкрупного рогатого скота производится несколькими методами. Наибольшеераспространение получил морфологический метод. Установлено, что результатыимплантации эмбрионов зависят от того, насколько полно оценена способностьоплодотворенных яйцеклеток к развитию.

Поморфологическим признакам и эмбриональной стадии развития, эмбрионы можноклассифицировать  на пригодные инепригодные к трансплантации. При морфологической оценке эмбрионов основноевнимание обращают на фрмулу зиготы, состояние её зоны пеллюцида, числобластомеров, равномерность дробления, выраженность эмбриобласта и трофобласта.

Кромеморфологической, дается оценка эмбрионов по адсорбционным свойствам оболочек ицитоплазмы бластомеров к различным красителям. Для улучшения морфологическойоценки используют флюоресцентную окраску, позволяющую отличить живые эмбрионыот погибших. В частности, этот метод наиболее пригоден для оценкижизнеспособности эмбрионов крупного рогатого скота после их культивирования изамораживания. С помощью флюоресцентных красящих веществ FDAи DAP1через 3-10-минутный период возможно быстрое и достаточно надежное определениеспособности эмбрионов к развитию в ранних стадиях. Живые эмбрионы и даже живыебластомеры ярко флюоресцируют после инкубации в FDA,но не флюоресцируют послеинкубации в DAP1.У погибших эмбрионов или бластомеров реакцииобратные. Эти методы позволяют более точно определять жизнеспособностьэмбрионов под микроскопом.

Ряд авторов предлагаетиспользовать синьку Эванса. В живых эмбрионах при температуре 37 градусов еюокрашивается только зона пеллюцида, которую затем обесцвечивают в раствореРингера. В мертвых же эмбрионах краска прочно фиксируется на бластомерах.

Как считает М. И. Прокофьев[2],могут быть гистохимические методы оценки жизнеспособности эмбрионов, основанныена специфических реакциях структурных элементов и веществ клеток к витальным ифлюоресцентным красителям. Такие реакции протекают очень интенсивно и быстро,что позволяет ускорить процесс оценки эмбрионов.

Однако следует учитывать,что флюоресцентная окраска лишь дополняет и улучшает основной метод оценкиэмбрионов — морфологический. Наиболее важными морфологическими признаками приоценке жизнеспособности эмбрионов служат объем, окраска, расположение клеток,величина перивиталлинового пространства и вид неповрежденной зоны пеллюцида.Идеальный эмбрион должен быть компактным, сферической формы, с однороднойокраской, с клетками одинаковой величины, с гладкой, плоской и равномерносформированной зоной пеллюцида, без включений в перивителлиновом пространстве.

Важнейшим критерием дляоценки качества эмбрионов является интенсивность развития стадий. Эмбрионы сзамедленным развитием не используются для пересадки, замораживания и другихманипуляций.

При оценке качества эмбрионав нашей стране принята 5-балльная шкала с учетом следующих показателей:соответствия стадии развития эмбриона его возрасту; правильности формыпрозрачной оболочки и ее целостности; равномерности дробления бластомеров,состояния цитоплазмы; прозрачности перивителлинового пространства.

Наиболее пригодными длятрансплантации являются эмбрионы, извлеченные из матки коровы-донора на 7-8сутки после первого осеменения. Как показывают результаты исследований ипрактика, в это время нормально развитые эмбрионы, пригодные для трансплантацииреципиентам, находятся в стадии поздней морулы или бластоцисты. Эти эмбрионыиспользуют для пересадки гормонально подготовленным коровам-реципиентам.

Выбраковке подлежатдегенерированный неоплодотворенные яйцеклетки (ооциты), которые можнообнаружить при извлечении эмбрионов. Морфологически неинтактные, непригодныедля трансплантации эмбрионы имеют дефектную морулу, или бластоцисту, признакамикоторых являются дефекты прозрачной оболочки, распад бластомеров, разнаявеличина бластомеров, нарушение межклеточной связи.

В стадии поздней бластоцистынепригодные для трансплантации эмбрионы характеризуются деформацией иослаблением бластомеров, разрывом межклеточных связей и целостности зоныпеллюцида.

6.   Пересадка эмбрионов реципиентам.

Вкачестве реципиентаотбирают гинекологически здоровых коров последвух-трех нормальных половых циклов. Для отбора реципиентов основнымпоказателем является отсутствие гинекологических отклонений, а продуктивные,племенные и породные качества большой роли не играют. Вместе с тем, уреципиентов с плохой упитанностью, низкой оплодотворяемостью после первогоосеменения, могут плохо приживаться эмбрионы. В среднем на каждого донораотбирают 5-6 реципиентов. Большинство специалистов считает, что в качествереципиентов наиболее пригодны полновозрастные телки с хорошими племеннымикондициями.

Основнымусловием   хорошего приживления эмбрионовслужит синхронность проявления половой охоты у доноров и реципиентов. Разницаво времени в проявлении половой охоты не должна превышать 24 ч, оптимальные жерезультаты получаются при разнице не более 12 часов.

Присовременном уровне техники трансплантации рекомендуется пересаживать эмбрионысразу после их извлечения из рогов матки донора и оценки.

Внастоящее время пересадка эмбрионов реципиентам производится хирургическим инехирургическим способами. При пересадке нужно точно знать местонахождениеэмбриона в половых путях коровы. Это связано с переходом предимплантационногопериода, в котором находится эмбрион до пересадки, в новый периодэмбрионального развития — имплантационный. При естественном теченииэмбрионального периода зародый на стадии морулы или бластоцисты находится вверхнем отделе рога матки, поэтому и наиболее благоприятным местом для егоаппликации является верхняя часть рога матки реципиента. Установлено, чтопересадка эмбрионов глубоко в рог матки реципиента лучше всего обеспечиваетсяхирургическим способом. При нехирургической же пересадке, которая происходит впериод диэструса место аппликации эмбриона в роге матки контролируется менееточно.

Эффективностьхирургического способа пересадки эмбриона составляет 60-70%, а число телят — 3-4 на донора. Хирургический способ использовали в основном до середина 70-хгодов. Однако он требует больших затрат средств. Кроме того, широкое применениехирургического метода сдерживается сложностью проведения операций впроизводственных условиях, получением травм вследствие резекции мышц, иневозможностью многократного использования реципиента. Поэтому последние 10-15лет пересадку эмбрионов в основном осуществляют нехирургическимспособом.

Принехирургической пересадке основным достоинством, кроме простоты иэкономичности, является возможность многократного использования реципиента.Разработано несколько способов нехирургической пересадки эмбрионов. Однако всеони основаны на одном принципе — введении эмбриона в рог матки через шейку,вследствие чего этот способ назван также цервикальным.

Послепересадки эмбрионов проводят тщательный контроль за реципиентами, обращаяособое внимание на возможное проявление у них повторной половой охоты.

Дляустановления стельности у коров-реципиентов используют несколько методов:визуальный; по уровню прогестерона в крови или молоке; клинический, главнымобразом путем ректальной пальпации.

Важнымзвеном селекционно-племенной работы является достоверность установленияистинного происхождения телят, полученных при трансплантации эмбрионов отгенетически ценных родителей. Истинное происхождение можно установить погруппам крови и типам белков крови. Пробу крови берут у теленка в возрасте от 4недель до 4 месяцев.

Существеннойпричиной, снижающей эффективность нехирургической пересадки эмбрионов, являетсявозможное повреждение эндометрия при введении катетера. В то же время обобщениерезультатов исследований по нехирургической пересадке эмбрионов показывает, чтоэффективность пересадки в большей степени зависит не от того, как глубоко будетвведен катетер в рог матки, а от того, насколько правильно выполнено введение.

Однакона этот счет имеется и другая точка зрения [7]: что конструкция приборовсущественно не влияет на результаты извлечения и пересадки эмбрионов. Этирезультаты более связаны с типом гонадотропина, квалификацией оператора,качеством и стадией развития эмбрионов.

Вцелом же следует отметить, что нехирургический метод пересадки эмбрионовобеспечивает аппликацию зародышей в среднем 50-60%, а применение маточныхрелаксантов перед пересадкой — до 75%. Это существенно выше, чем прихирургическом методе. Технология нехирургического метода трансплантации сходнас искусственным осеменением коров и продолжается 3-5 минут, или 15-20 пересадокв час.

Особоговнимания заслуживает приём, ĎĐÉÓÁÎÎŮĘ× ŇÁÂĎÔĹ Sertich P.L.[6],заключающийся  в нехирургической пересадке двух эмбрионов,по одному в каждый рог матки, что еще больше повышает эффективностьтрансплантации. Этот приём может быть применен для повышения частоты рожденияразнояйцевых (дизиготных) двоен. Он позволяет получить двойные отелы у коров,особенно мясных пород, намного быстрее, чем генетическим путем (т.е.селекцией).

Результатыпроведенных исследований показывают, что нехирургическая пересадкадополнительного эмбриона во второй рог матки дает возможность увеличить выходноворожденных телят на 30%. При пересадке двух эмбрионов в каждый рог маткичастота двоен составляет в среднем 55-60%, вместо 2% при естественноммногоплодии коров.

Можнопересаживать (подсаживать) эмбрион и оплодотворенной корове, но вконтрлатеральный по отношению к желтому телу в яичнике рог матки. Средняяприживляемость эмбрион

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Добавить комментарий

;-) :| :x :twisted: :smile: :shock: :sad: :roll: :razz: :oops: :o :mrgreen: :lol: :idea: :grin: :evil: :cry: :cool: :arrow: :???: :?: :!:

Этот сайт использует Akismet для борьбы со спамом. Узнайте как обрабатываются ваши данные комментариев.